碘化乙啶(HI)：Ethidium Iodide的细胞通透性与选择性染色
&使用方法
溶液配制
母液制备：
用DMSO溶解粉末，配成5 mg/ml储存液（如5 mg粉末+1 ml DMSO），分装避光保存于-20°C。
工作浓度：
根据实验调整，常用终浓度为5–20 μg/ml 。
2. 染色步骤（以细菌染色为例）
样品处理：
取1 ml细菌悬液（密度5×10⁸ cells/ml）置于离心管。
加入20 μl储存液（终浓度≈100 μg/ml），混匀。
孵育条件：
室温避光孵育15分钟。
清洗：
冰DPBS清洗2次（4°C, 3,000 rpm, 10 min）。
检测：
流式细胞仪：FL2通道（Ex/Em=488/575 nm）。
荧光显微镜：使用518 nm激发光，收集600 nm发射信号。
3. 注意事项
避光操作：全程避光防止荧光淬灭。
防护措施：穿戴实验服及手套，避免直接接触（潜在遗传毒性类比溴化乙锭）。
对照设置：需设空白对照（未染色样品）及单染对照。
试剂信息
英文名称：Ethidium Iodide
中文名称：碘化乙啶(HI)
CAS NO：211566-66-4
分子式：C25H28IN3
分子量：497.41
状态：固体
Ex/Em：~518/600nm（与DNA结合）
溶解性：溶于DMSO
纯度：≥95%
储存条件：-20℃避光干燥
&作用机制
1.核酸结合机制
碘化乙啶通过嵌入DNA双螺旋碱基对发挥作用：
其平面菲啶鎓环插入DNA碱基对之间，与核酸形成非共价结合。
结合后染料构象固定，荧光强度增强（游离状态荧光极弱）。
2. 细胞通透性与选择性染色
细胞膜通透性：
具中等亲脂性，可自由穿透哺乳动物细胞膜及革兰氏阳性菌细胞壁。
选择性染色机制：
在含革兰氏阴性菌（如大肠杆菌）的环境中，优先染色革兰氏阳性菌（如金黄色葡萄球菌）。
可能机制：革兰氏阴性菌外膜脂多糖（LPS）阻碍染料进入，而革兰氏阳性菌肽聚糖层允许通透。
3. 亚细胞定位
染色真核细胞的细胞质、细胞核，可能涉及线粒体及核仁。
局限性：因可能污染其他亚细胞结构（如内质网），不建议作为特异性核染色剂。
&相关试剂
Alexa Fluor 647-Streptavidin
Alexa Fluor 680-Streptavidin
TOTO 1 Green Fluorescent Dye
TOTO 3 Far-red Fluorescent Dye
TO-PRO-1 Green Fluorescent Dye
WSP-5(H2SProbe)硫化氢荧光探针
PE-Streptavidin,PE-Cy7标记链霉亲和素
APC-Streptavidin，APC标记链霉亲和素
149733-79-9，Lucifer Yellow Cadaverine
Indo-1 Pentapotassium Salt, Cell lmpermeant
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本试剂用于科研领域，其他用途概不适用！