CoroNa Green acetoxymethyl (AM) ester关于贴壁细胞的实验步骤
一、物化性质
保存条件：避光、-20°C储存，避免反复冻融
英文名称：CoroNa Green,AM,Cell Permeant；CoroNa Green acetoxymethyl (AM) ester
中文名称：钠离子探针
分子量：657.62
适用于（应用）：细胞活力与增殖
适用于（设备）：荧光显微镜
最大吸收：492nm
外观性状：固体
包装：瓶装
二、功能结构与组成
CoroNa™ Green, AM 是一种基于乙酰甲酯（Acetoxymethyl ester, AM）修饰的钠离子敏感性荧光染料。
AM 酯形式：具有良好的细胞膜通透性，进入细胞后被内源性酯酶水解为带负电荷的活性形式，从而滞留在细胞内。
对 钠离子 的选择性：对 钠离子 具有较高亲和力（Kd ≈ 68 mM），在生理浓度范围内（~5-150 mM）响应良好；但对 K⁺、Ca²⁺、Mg²⁺ 等其他阳离子交叉反应较弱（但仍需注意）。
工作原理
细胞渗透：AM酯基团使探针亲脂，能够快速穿透细胞膜。
酯酶水解：细胞内的酯酶将 AM 酯切除，生成亲水性的 CoroNa Green（带负电），锁定在细胞质中。
钠离子 结合：活性染料的冠醚位点专一配位 钠离子，形成 钠离子-染料复合物。
荧光响应：钠离子 结合后荧光强度显著增强（约 3-5 倍），而激发/发射波长几乎不变，便于使用常规的 FITC/绿色通道进行检测。
信号读取：可通过荧光显微镜、流式细胞仪或高通量读板仪实时定量细胞内 钠离子动态。
三、典型实验步骤（以贴壁细胞为例）
1. 探针储存
溶解于无水 DMSO，配制成 1-5 mM 储存液，分装避光 -20°C 保存（避免反复冻融）
2. 工作液配制
使用 HBSS 或无血清培养基稀释储存液至 1-5 µM（常用 2.5 µM）
可加入 0.02-0.04% Pluronic F-127 助溶（尤其在含血清培养基中）
3. 细胞加载
弃去培养基，用预热缓冲液（如 HBSS）轻柔洗涤细胞 1 次
加入含 CoroNa Green AM 的工作液，37°C 孵育 30-60 分钟
孵育后，用缓冲液洗涤 2-3 次，去除未进入细胞的染料
继续孵育 15-30 分钟（“脱酯化”期），使 AM 酯充分水解为活性形式
4. 成像或检测
使用 FITC/GFP 通道（Ex ~488 nm, Em ~515-530 nm）进行荧光检测
实时监测 钠离子 动态变化（如加入 钠离子 通道激动剂、抑制剂等）
四、关联试剂
Cy5-PEG-FA
Cy5-PEG-Alkyne
Cy5-PEG-Azide
Cy5-PEG-DBCO
Cy5-PEG-TCO
Cy5-PEG-Tetrazine
Cy5-PEG-Cholesterol
Cy5-PEG-DSPE
Cy5-PEG-PLA
Cy5-PEG-PCL
Dibenzocyclooctyne-Cy5.5
DBCO-CONH-S-S-NHS ester
Azido-PEG4-Val-Cit-PAB-MMAE
BDP 650/665 DBCO
Propargyl-PEG4-hydrazide
DBCO-(PEG2-VC-PAB-MMAE)2
2-Amino-2-(3-(trifluoromethyl)phenyl)acetic acid
（本文内容由陕西新研博美生物科技有限公司木南整理）
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